GCN1L1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-411545-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GCN1L1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GCN1L1ダブルニカースプラスミド（h）およびGCN1L1ダブルニカースプラスミド（h2）は、GCN1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GCN1L1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-411545-NIC | 20 µg | $410.00 |
GCN1は、アミノ酸欠乏およびそれに関連するストレス下でeIF2αキナーゼであるGCN2の活性化を促進することで、翻訳中のリボソームと統合ストレス応答（ISR）を結び付ける保存性の高い補因子GCN1L1をコードしています。このリボソーム関連のセンシング機構を介して、GCN1L1は翻訳のリプログラミング、ATF4依存的な転写出力、ならびに栄養シグナル伝達や細胞の適応と交差する、より広範なプロテオスタシス経路に影響を与えます。GCN1–GCN2軸を含むISR構成要素の機能不全は、代謝恒常性の変化、神経生物学、そして疾患モデル化に関連するストレス関連の細胞表現型と結び付くことが、文献において報告されています。そのため、GCN1L1は栄養欠乏応答、プロテオトキシックストレス、翻訳制御といった文脈でしばしば研究対象となります。
GCN1L1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GCN1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GCN1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GCN1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GCN1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。