GCN1L1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411545-ACT

ヒトGCN1（GCN1L1）は、リボソーム関連コファクターをコードしており、アミノ酸欠乏やそれに関連する栄養ストレス下でeIF2αキナーゼであるGCN2の活性化を促進することで、翻訳ストレスを統合ストレス応答（Integrated Stress Response：ISR）へと結び付けます。この機能を通じて、GCN1L1は全体的な翻訳抑制と、プロテオスタシスおよび代謝適応を支える選択的翻訳プログラムとの協調を助けます。GCN1L1により制御されるストレスシグナル伝達が乱れると、ATF4依存性の転写出力、オートファジー、ならびにプロテオトキシック条件や栄養欠乏条件下における細胞の生存／死の意思決定に影響を及ぼし得ます。これらの経路の破綻は、腫瘍細胞のストレス耐性、神経変性に関連するプロテオスタシス異常、代謝性疾患の機序などの文脈で示唆されており、GCN1L1は経路に焦点を当てた研究に有用なノードとなります。

GCN1L1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GCN1L1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GCN1L1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGCN1L1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGCN1L1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。