GC-C Plasmide Double Nickase (h): sc-403413-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GC-C Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GC-C Double Nickase Plasmid (h) e il GC-C Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GUCY2C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GC-C Antibody (537): sc-100302
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GC-C Plasmide Double Nickase (h) | sc-403413-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GC-C Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403413-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GUCY2C codifica la guanilato ciclasi C (GC-C), un recettore transmembrana che converte il GTP in cGMP in risposta a ligandi extracellulari, regolando così il trasporto ionico epiteliale e l’omeostasi dei fluidi. La segnalazione mediata dal cGMP indotta da GC-C coinvolge effettori a valle come PKG e fosfodiesterasi modulate dal cGMP, contribuendo a definire il trasporto di membrana, la funzione di barriera e i programmi di stato cellulare nei tessuti mucosali. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di GUCY2C sono state associate a una fisiologia epiteliale disfunzionale e vengono studiate nel contesto dei processi infiammatori intestinali e della trasformazione epiteliale. In quanto recettore epiteliale associato alla linea cellulare, GC-C viene inoltre utilizzato come strumento molecolare per analizzare risposte di segnalazione specifiche di tessuto e la biologia dei marcatori in modelli cellulari umani.
GC-C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GUCY2C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GUCY2C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GUCY2C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GUCY2C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.