GBX2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420503-ACT

マウスのGbx2は、ホメオボックス型転写因子GBX2をコードしており、発生期の中枢神経系における胚のパターニングと領域アイデンティティを制御する主要な調節因子である。GBX2は神経管および後脳の発生を協調させる転写プログラムに関与し、WNT、FGF、レチノイン酸シグナルなどのモルフォゲン駆動性ネットワークと相互作用しながら、前後軸境界の形成や神経系細胞系譜の規定を担う。GBX2依存的な遺伝子制御の攪乱は、神経発達の調節異常や先天奇形の研究において重要であり、境界形成や細胞運命決定の変化が長期にわたる表現型上の影響を及ぼしうる。成体や幹／前駆細胞の文脈では、GBX2は分化軌道や転写因子階層を検討するためのマーカーおよび機構的ハブとして用いられている。

GBX2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Gbx2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GBX2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Gbx2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGbx2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GBX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGbx2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGBX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGbx2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGBX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。