GATAD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403468-ACT

GATAD1 (GATA zinc finger domain containing 1) codifica uma proteína nuclear de ligação ao DNA, implicada no controlo transcricional associado à cromatina através do seu domínio “zinc finger” e da interação com complexos reguladores. Ao modular a atividade de promotores e potenciadores (enhancers), a GATAD1 pode influenciar programas de expressão génica ligados à progressão do ciclo celular, à diferenciação celular e à sinalização responsiva ao stress. Alterações na expressão ou perturbações genéticas de GATAD1 foram relatadas em múltiplos contextos tumorais, sustentando a investigação do seu papel em redes transcricionais oncogénicas e na desregulação epigenética. Isto torna a GATAD1 um alvo útil para estudar como reguladores da cromatina moldam vias a jusante que afetam a proliferação e a estabilidade do genoma.

GATAD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GATAD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GATAD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GATAD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GATAD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GATAD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GATAD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GATAD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GATAD1 em células tumorais com expressão de GATAD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.