GATA4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400122-NIC

GATA4は、GATAモチーフに結合するジンクフィンガー型転写因子をコードしており、心臓の形態形成、心筋細胞の分化、ならびに内胚葉由来臓器の発生を制御する遺伝子プログラムを調節する。NKX2-5、TBX5、FOGファミリータンパク質などの補因子と協調して、GATA4はBMP、WNT、MAPK経路を含むシグナル入力を統合し、系譜の規定（リネージ仕様化）と組織リモデリングを協調的に制御する。GATA4の発現量（ドサージュ）や配列の変化は、心臓および消化管の発生を司る転写ネットワークを攪乱し得るほか、GATA4依存的エンハンサー活性の制御異常は、先天性心疾患や心筋症に関連する遺伝子発現変化と関連づけられている。クロマチンに結合して転写を制御する結節的（ノード的）な調節因子として、GATA4は発生過程の遺伝子制御回路や細胞運命制御の研究に広く用いられている。

GATA4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GATA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GATA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GATA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GATA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。