GATA3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400134-NIC

GATA3は、GATAモチーフに結合して系譜決定や分化プログラムを制御する亜鉛フィンガー型転写因子をコードしており、T細胞発生、Th2極性化、上皮細胞の運命決定において重要な役割を担います。免疫細胞では、GATA3がサイトカイン遺伝子発現とクロマチンリモデリングを協調的に制御し、2型炎症シグナル伝達の形成に寄与します。一方、上皮細胞の文脈では、転写ネットワークの調節を通じて分化状態の維持に関与します。GATA3により制御される回路の攪乱は、免疫調節異常や分化の変容と関連することが示されており、転写制御、細胞アイデンティティ、刺激応答性遺伝子発現における重要な研究対象として広く解析されています。核内レギュレーターとしてのGATA3は、エンハンサー利用、転写因子間の協調作用、細胞状態遷移に関する研究で頻繁に検討されています。

GATA3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GATA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GATA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GATA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GATA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。