Gas1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404384-ACT

O GAS1 humano (growth arrest specific 1) codifica uma proteína de superfície celular ancorada por GPI que modula a sinalização por morfógenos e o controle do ciclo celular, com papéis de destaque no estabelecimento de padrões durante o desenvolvimento e na regulação da proliferação. O Gas1 pode influenciar a atividade da via Hedgehog por meio de interações com ligantes e receptores na membrana plasmática, conectando sinais extracelulares a programas transcricionais que moldam a diferenciação e a parada de crescimento. A expressão alterada de GAS1 tem sido associada à desregulação da sinalização Hedgehog e a mudanças nas decisões de destino celular, processos frequentemente estudados em neurodesenvolvimento, homeostase tecidual e biologia tumoral. Como regulador localizado na membrana, o GAS1 também é relevante para investigar a organização de receptores, a definição de limiares de sinalização e a comunicação cruzada entre vias dependente de contexto.

Gas1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GAS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gas1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GAS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GAS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gas1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GAS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gas1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gas1 em células tumorais com expressão de GAS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.