GART Double Nickaseプラスミド (h): sc-403800-NIC

ヒトGARTは、de novoプリン生合成経路の主要な段階を触媒する三機能性酵素をコードしており、イノシン一リン酸（IMP）および下流のアデニン／グアニンヌクレオチドの産生を支えます。ヌクレオチドの利用可能性を制御することで、GARTはDNA・RNA合成、ATP/GTP依存性シグナル伝達、ならびに葉酸依存反応を介した一炭素代謝に影響を与えます。GART活性は増殖需要と密接に連動し、生合成フラックスを細胞周期の進行と協調させる、より広範な代謝プログラムにも組み込まれています。GART座位におけるプリン代謝の変化や遺伝子量（コピー数）の変動は、代謝調節異常や神経発達に関わる表現型と関連づけられており、GARTはヌクレオチド恒常性の機序解明研究における重要な標的となっています。

GART ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GART 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GART内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GARTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GARTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。