Ganglioside sialidase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404848-ACT

NEU3は、ヒトの形質膜に関連するガングリオシドシアリダーゼをコードしており、ガングリオシドおよび関連する糖スフィンゴ脂質から末端のシアル酸を除去して、細胞表面の糖鎖組成を再構成します。ガングリオシド依存的な膜マイクロドメインを調節することで、NEU3は受容体型チロシンキナーゼのシグナル伝達、細胞接着や遊走、そして脂質—タンパク質の組織化の変化に応答するMAPK/PI3K関連経路などの下流経路に影響を及ぼし得ます。シアリダーゼ活性の変化は糖スフィンゴ脂質代謝や炎症性シグナル伝達ネットワークにも影響するため、NEU3は糖鎖リモデリングが細胞間コミュニケーションをどのように制御するかを研究するうえで有用な結節点となります。NEU3発現の破綻は、異常増殖や組織リモデリングを伴う状況で報告されており、疾患関連のシグナル伝達や膜生物学の機序研究における重要性を裏づけています。

Ganglioside sialidase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NEU3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ganglioside sialidase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NEU3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNEU3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ganglioside sialidaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNEU3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGanglioside sialidase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNEU3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGanglioside sialidase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。