GALR2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403779-ACT

ヒトGALR2はガラニン受容体2（GALR2）をコードしており、神経ペプチドのガラニンに結合するクラスAのGPCRである。GALR2は、神経の興奮性、神経伝達物質放出、神経内分泌分泌を調節する。リガンド結合により、GALR2は主にGq/11と共役してPLCβを活性化し、IP3/DAGシグナル伝達、細胞内Ca2+動員、PKC依存性経路を誘導する。さらに状況依存的に他のGタンパク質とも共役し、MAPK/ERKシグナルや遺伝子発現プログラムの形成に影響を与える。これらのシグナル出力を通じて、GALR2は疼痛処理、気分関連行動、摂食とエネルギーバランス、ならびに末梢組織における平滑筋収縮の調節に関与する。GALR2の発現やシグナル伝達の破綻は、神経精神疾患および代謝表現型、さらにGPCR駆動性経路が増殖・生存・遊走に影響し得る腫瘍生物学の領域で検討されており、機序解明研究における経路プローブとしての有用性が示されている。

GALR2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GALR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GALR2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GALR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGALR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GALR2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGALR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGALR2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGALR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGALR2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。