galectin-9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402321-ACT

ヒトのLGALS9は、β-ガラクトシド結合レクチンであるガレクチン-9をコードしており、糖鎖修飾された受容体や細胞外マトリックス成分を認識することで、細胞間相互作用および細胞‐マトリックス相互作用を調節します。ガレクチン-9は、サイトカイン応答、白血球のトラフィッキング、アポトーシス・プログラムを形成することにより免疫シグナル伝達と炎症の基調に影響し、さらにTIM-3などのチェックポイント関連経路を介して腫瘍‐免疫クロストークを再構築し得ます。報告されている機能から、LGALS9はT細胞疲弊の制御、骨髄系細胞の極性化、上皮‐間質コミュニケーションの調節に関与することが示されており、がん免疫生物学、自己免疫、慢性炎症性疾患との関連が示唆されます。また、その活性はストレス応答や小胞輸送／分泌プロセスとも結びついており、組織微小環境における可溶性ガレクチン-9の利用可能性（量や分布）に影響を与えます。

galectin-9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LGALS9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

galectin-9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LGALS9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLGALS9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性galectin-9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLGALS9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgalectin-9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLGALS9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgalectin-9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。