Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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galectin-4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404255-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- galectin-4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- galectin-4ダブルニカースプラスミド（h）およびgalectin-4ダブルニカースプラスミド（h2）は、LGALS4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: galectin-4 抗体 (D-11): sc-376398
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
galectin-4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404255-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
galectin-4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404255-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LGALS4 はガレクチン4（galectin-4）をコードしており、腸管や上皮組織に豊富に存在する β-ガラクトシド結合性レクチンである。ガレクチン4は細胞表面および細胞外環境で機能し、グリカン依存的な相互作用を組織化する。特定の糖タンパク質や糖脂質に結合することで、上皮の極性、接着結合／タイトジャンクションの安定性、ならびに細胞—細胞および細胞—マトリックス接着の調節に寄与し、細胞移動やバリア恒常性に影響を与える。さらに、受容体クラスター形成やエンドサイトーシス輸送の制御を介して、粘膜免疫や炎症シグナルに関連する過程とも交差する。LGALS4 発現の異常は、上皮分化の変化や大腸疾患の文脈と関連づけられており、グリカン媒介性シグナル伝達やバリア生物学を解明するための有用な標的となっている。
galectin-4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LGALS4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LGALS4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LGALS4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LGALS4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。