galectin-3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421416-ACT

マウスLgals3は、β-ガラクトシド結合性レクチンであるガレクチン3をコードしており、細胞質、核、細胞表面、および細胞外環境に局在して、細胞—細胞および細胞—マトリックス相互作用を調節します。ガレクチン3は、接着、遊走、貪食、炎症性サイトカイン応答に影響する糖鎖依存的シグナル伝達を制御し、マクロファージ活性化や線維芽細胞の生物学における役割が報告されています。また、アポトーシス抵抗性、エンドサイトーシス、自然免疫シグナル伝達（パターン認識受容体により駆動される応答を含む）を制御する経路とも交差します。ガレクチン3発現の異常は、組織リモデリングおよび線維化、腫瘍—間質相互作用、慢性炎症状態と関連しており、疾患関連モデル系における機序解明上の重要な結節点としての利用を支持します。

galectin-3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Lgals3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

galectin-3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Lgals3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLgals3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性galectin-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLgals3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgalectin-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLgals3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgalectin-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。