GADD 45β CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401286-ACT

GADD45B（GADD45β）は、増殖停止およびDNA損傷誘導（GADD45）ファミリーに属するストレス誘導性タンパク質であり、遺伝毒性、炎症性、代謝性のシグナルを統合して細胞運命の決定を調節します。DNA損傷応答および修復関連のシグナル伝達に関与し、MAPK経路（JNKやp38を含む）やNF-κB制御下のプログラムとも連携しながら、細胞周期制御、アポトーシス、ならびにストレスへの細胞適応に影響を及ぼし得ます。ヒト細胞では、GADD45βの発現異常が、がん生物学や免疫関連病態を含む複数の疾患状況で観察されるストレスシグナル伝達および転写応答の変調と関連づけられています。これらの特性により、GADD45βはDNA損傷シグナル、炎症、そして生存プログラムの間の経路クロストークを解析するための有用な分子ノードとなります。

GADD 45β CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GADD45Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GADD 45β CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GADD45B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGADD45B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GADD 45βの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGADD45B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGADD 45β依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGADD45B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGADD 45β経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。