GABA_A Rγ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402057-ACT

GABRG2 codifica a subunidade γ2 do recetor GABA\(_A\) humano, um canal de cloreto ativado por ligando que medeia a neurotransmissão inibitória rápida no sistema nervoso central. A incorporação de γ2 é fundamental para a montagem do recetor, o direcionamento sináptico e a modulação por ligandos do sítio das benzodiazepinas, moldando assim a excitabilidade neuronal e as oscilações de rede. A sinalização do recetor GABA\(_A\) influencia a polarização da membrana, os limiares de disparo de potenciais de ação e a plasticidade sináptica dependente da atividade em diversos circuitos neuronais. Perturbações genéticas e funcionais de GABRG2 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e relacionados com crises epilépticas, tornando-o um componente amplamente estudado da biologia das sinapses inibitórias.

GABAA Rγ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GABRG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GABAA Rγ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GABRG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GABRG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GABAA Rγ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GABRG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GABAA Rγ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GABAA Rγ2 em células tumorais com expressão de GABRG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.