GABA_A Rδ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401954-ACT

GABRDは、ヒトGABA_A受容体のδサブユニットをコードしています。GABA_A受容体はリガンド作動性の塩化物チャネルであり、中枢神経系における持続性（トニック）の抑制性神経伝達を担います。δサブユニットがシナプス外の受容体複合体に取り込まれると、周囲に存在するGABAに対する高い感受性が付与され、神経細胞の興奮性やネットワーク振動を形作る持続的な塩化物コンダクタンスに寄与します。抑制トーンの調節を通じて、GABA_A受容体δシグナルはシナプス可塑性、ストレス応答性の神経ステロイドによる調節、ならびに興奮—抑制バランスと相互に関わります。GABRDの発現変化や受容体組成の変化は、抑制性シグナルの破綻を伴う神経精神・神経学的表現型（発作感受性や気分関連のエンドフェノタイプなど）と関連することが研究で示されています。

GABAA Rδ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GABRDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GABAA Rδ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GABRD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGABRD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GABAA Rδの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGABRD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGABAA Rδ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGABRD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGABAA Rδ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。