GABA_A Rα3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403044-NIC

GABRA3は、ヒトのγ-アミノ酪酸（GABA）A型受容体のα3サブユニット（GABAA Rα3）をコードしており、中枢神経系における速い抑制性神経伝達を媒介する、リガンド作動性塩化物チャネルの構成要素である。五量体のGABAA受容体にα3が組み込まれることで、チャネルの反応動態、シナプス性とシナプス外シグナル伝達のバランス、ならびに塩化物イオン伝導と膜電位調節を介した神経細胞の興奮性が影響を受ける。GABAA受容体を介するGABA作動性シグナルは、リン酸化依存的な調節、受容体のトラフィッキング、シナプス組織化に関わる経路と統合され、ネットワーク振動や発達期の回路形成を形作る。GABRA3を含むGABAA受容体サブユニットの発現や機能の変化は、神経発達および神経精神疾患様表現型、ならびに発作関連メカニズムとの関連で研究されている。

GABAA Rα3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GABRA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GABRA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GABRA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GABRA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。