G9a Plasmide Double Nickase (h): sc-402484-NIC

EHMT2 codifica la metiltransferasi della lisina G9a, uno dei principali enzimi responsabili della scrittura di H3K9me1/2, che stabilisce una cromatina repressiva e sostiene un silenziamento genico stabile durante lo sviluppo e la specificazione di linea. G9a opera in complessi epigenetici nucleari per coordinare l’organizzazione della cromatina, i programmi trascrizionali, le risposte al danno del DNA e il crosstalk con altre vie di metilazione degli istoni e del DNA. Alterazioni dell’attività di EHMT2/G9a sono state associate alla deregolazione trascrizionale diffusa osservata in oncologia, a fenotipi del neurosviluppo e alla segnalazione infiammatoria, rendendolo un nodo comune negli studi sulla plasticità epigenetica. L’analisi della metilazione di H3K9 dipendente da G9a aiuta a definire come lo stato della cromatina influenzi proliferazione, differenziamento e reti trascrizionali di adattamento allo stress nelle cellule umane.

G9a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EHMT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EHMT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EHMT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EHMT2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.