G530011O06Rik CRISPR Activationプラスミド (m): sc-437289-ACT

マウスのG530011O06RikはG530011O06Rikタンパク質をコードしており、現行の経路データベースにおける機能アノテーションが限られた、十分に特徴づけられていない因子です。利用可能な証拠からは、転写調節、RNA代謝、あるいは状況依存的な他の制御プログラムなど、基本的な細胞プロセスに関与する可能性が示唆されており、遺伝子ネットワーク構造のシステムレベル解析において重要となり得ます。RIKEN cDNAコレクションに含まれる遺伝子は、系統特異的または刺激応答性の転写産物であることが多いため、G530011O06Rikの発現を操作することで、細胞状態遷移、ストレス応答、発生プログラムの解明に役立つ可能性があります。その内在的役割を定義することは、遺伝子発現の破綻が病的表現型に寄与する疾患関連モデルにおける機序研究に示唆を与え得ますが、臨床的有用性を示唆するものではありません。

G530011O06Rik CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性G530011O06Rikの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

G530011O06Rik CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における G530011O06Rik 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はG530011O06Rik転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性G530011O06Rikの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のG530011O06Rik遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるG530011O06Rik依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびG530011O06Rik発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるG530011O06Rik経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。