FX Double Nickaseプラスミド (h): sc-408777-NIC

TSTA3は、GDP-マンノースからde novoでGDP-フコースを生合成する経路の最終段階を触媒する細胞質酵素であるGDP-L-フコース合成酵素（FX）をコードしています。細胞内のGDP-フコース量を制御することで、FXは細胞表面および分泌タンパク質上のグリカンのフコシル化を支え、タンパク質の折りたたみ、受容体―リガンド相互作用、細胞外マトリックスを介したコミュニケーションに影響を与えます。フコシル化の変化は細胞接着やシグナル伝達の変動と関連しており、免疫調節、炎症、腫瘍に伴うグリカンのリモデリングとも関係します。そのため、TSTA3の機能破綻または発現・活性の異常は、発生や疾患関連の細胞表現型を形作る糖鎖修飾依存性経路に影響し得ます。

FX ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TSTA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TSTA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TSTA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TSTA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。