FUT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409559

Panoramica

FUT2 codifica la α(1,2)-fucosiltransferasi 2, una glicosiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la fucosilazione terminale dei glicani per generare antigeni H di tipo 1/2 sulle superfici epiteliali mucosali e nelle secrezioni. Controllando i motivi glicanici fucosilati su glicoproteine e glicolipidi, FUT2 influenza il traffico proteico, le proprietà di barriera dell’epitelio e le interazioni ospite–microbo a livello della mucosa intestinale e delle vie aeree. La variabilità genetica e le alterazioni dell’attività di FUT2 sono associate allo stato di secretore e a differenze correlate nei pattern di glicosilazione mucosale, che a loro volta si correlano con la suscettibilità a fenotipi infettivi e infiammatori. In quanto regolatore chiave degli eventi di riconoscimento dipendenti dai glicani, FUT2 è ampiamente studiato nella glicomica, nella biologia del microbioma e nell’immunologia epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FUT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FUT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FUT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FUT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FUT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FUT2 per lo studio della segnalazione di FUT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FUT2 critici per la funzione di FUT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FUT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FUT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FUT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FUT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FUT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FUT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FUT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FUT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.