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FUNDC1慢病毒激活颗粒(h) | sc-403031-LAC | 200 µl | $455.00 |
FUNDC1(FUN14 domain containing 1)编码一种线粒体外膜受体,可通过其 LIR 基序与 LC3 结合,介导对缺氧反应性的线粒体自噬(mitophagy),并协调选择性清除受损线粒体。FUNDC1 的活性受磷酸化依赖的信号调控,并与控制线粒体动力学、生物能量学以及活性氧(ROS)稳态的通路相互作用。由于其在线粒体质量控制中的作用,FUNDC1 已在细胞应激适应与炎症信号等背景下被广泛研究,并有报道将其与心脏代谢功能障碍、神经退行性过程以及癌症相关的代谢重塑联系起来。调控 FUNDC1 的表达为研究缺氧及其他应激因素下,线粒体自噬与线粒体周转如何重塑细胞命运决策提供了一种可行的手段。
FUNDC1 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 FUNDC1 表达。
FUNDC1 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在FUNDC1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性FUNDC1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 FUNDC1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。