FucT-VII Double Nickaseプラスミド (h): sc-408027-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- FucT-VII Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- FucT-VIIダブルニカースプラスミド（h）およびFucT-VIIダブルニカースプラスミド（h2）は、FUT7を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
FucT-VII Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408027-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FucT-VII Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-408027-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUT7 は α1,3-フコシルトランスフェラーゼ VII（FucT-VII）をコードしており、ゴルジ体に局在する糖転移酵素として、シアリル Lewis X および関連するフコシル化糖鎖の合成に必要な末端フコシル化反応を触媒します。この活性は、糖タンパク質や糖脂質上に機能的なセレクチンリガンドを形成させることで、炎症時の白血球のローリングや遊走（トラフィッキング）を支えるなど、白血球接着の生物学において中核的な役割を果たします。FUT7 による糖鎖付加は、細胞間認識、受容体シグナル伝達、免疫細胞表面の構造形成を規定する、より広範な糖鎖生合成経路とも交差しています。FUT7 の発現変動やフコシル化パターンの変化は、炎症応答の破綻や腫瘍に伴う糖鎖リモデリングと関連づけられており、接着機構や糖鎖—免疫相互作用のメカニズム研究における有用な標的となります。
FucT-VII ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FUT7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FUT7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FUT7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FUT7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。