FucT-IX Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416354-ACT

O FUT9 codifica a α1,3-fucosiltransferase IX (FucT-IX), uma glicosiltransferase residente no aparelho de Golgi que catalisa etapas terminais de fucosilação na biossíntese de antígenos do tipo Lewis, incluindo o Lewis X (CD15). Ao moldar as estruturas de glicanos na superfície celular e os glicanos secretados, a FucT-IX influencia eventos de reconhecimento dependentes de glicanos envolvidos em adesão celular, migração e interações entre células imunes. A atividade do FUT9 cruza-se com redes mais amplas de glicosilação que modulam a sinalização de receptores, programas de desenvolvimento e a diferenciação específica de linhagens, particularmente em contextos neurais e hematopoéticos. Padrões alterados de fucosilação e a desregulação do FUT9 têm sido associados a mudanças no comportamento de células tumorais e em microambientes inflamatórios, tornando o FUT9 um alvo útil para estudos mecanísticos de glicoepítopos na biologia das doenças.

FucT-IX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUT9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FucT-IX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUT9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUT9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FucT-IX. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUT9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FucT-IX no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FucT-IX em células tumorais com expressão de FUT9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.