FucT-IV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401795-ACT

FUT4 codifica a α(1,3)-fucosiltransferase IV (FucT-IV), uma glicosiltransferase localizada no Golgi que catalisa a fucosilação terminal de glicanos para gerar epítopos do tipo Lewis X em glicoproteínas e glicolipídeos. Ao moldar a arquitetura dos glicanos na superfície celular, a FucT-IV influencia a adesão mediada por selectinas, o tráfego de leucócitos e, de forma mais ampla, a sinalização dependente de glicosilação e a função de receptores. A atividade de FUT4 contribui para a regulação das interações entre células imunes e de processos inflamatórios por meio da modulação de ligantes fucosilados. A expressão desregulada de FUT4 e padrões alterados de fucosilação têm sido associados a fenótipos aberrantes de adesão e migração celular e são frequentemente estudados no contexto da biologia do câncer e da imunopatologia.

FucT-IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FucT-IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FucT-IV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FucT-IV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FucT-IV em células tumorais com expressão de FUT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.