FucT-III/V/VI Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401521-ACT

FUT3 codifica uma fucosiltransferase α(1,3/1,4) (família FucT-III/V/VI) que catalisa a fucosilação terminal de glicanos para gerar antígenos Lewis em glicoproteínas e glicolipídios. Essa enzima atua em redes de glicosilação do complexo de Golgi que moldam as estruturas de carboidratos na superfície celular, influenciando a adesão mediada por lectinas, a sinalização de receptores e a biologia das mucinas. Epítopos glicânicos gerados por FUT3 contribuem para o panorama molecular da diferenciação epitelial e das interações hospedeiro–microrganismo em superfícies mucosas. Alterações na atividade de FUT3 e na expressão de antígenos Lewis têm sido associadas a variações em fenótipos inflamatórios e a padrões de glicosilação ligados ao câncer, sustentando seu uso como um nó funcional em pesquisas de glicômica e adesão celular.

FucT-III/V/VI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FucT-III/V/VI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FucT-III/V/VI. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FucT-III/V/VI no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FucT-III/V/VI em células tumorais com expressão de FUT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.