FUCA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405275-ACT

FUCA1はリソソーム酵素であるα-L-フコシダーゼ1をコードしており、糖鎖分解（グライカン代謝）の過程で、N結合型糖鎖、糖脂質、糖タンパク質から末端のフコース残基を切り離すグリコシダーゼです。フコシル化基質のリソソーム依存的な分解・更新およびリサイクルを支えることで、FUCA1は細胞内の糖鎖修飾の恒常性に寄与し、さらにエンドソーム—リソソーム系の輸送やプロテオスタシスに関連する幅広いプロセスにも関わります。フコシダーゼ活性が変化すると、糖鎖リモデリングや、それに伴う細胞間相互作用、炎症、ストレス応答に関係するシグナル出力が乱れる可能性があります。FUCA1は遺伝性のリソソーム蓄積症の病態とも関連しており、異常な糖鎖修飾ががんや神経変性の表現型と結び付くことを検討するモデルにおいてもしばしば解析対象となります。

FUCA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FUCA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FUCA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FUCA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFUCA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FUCA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFUCA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFUCA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFUCA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFUCA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。