FTα Double Nickaseプラスミド (h): sc-403920-NIC

FNTAはファルネシルトランスフェラーゼのαサブユニット（FTα）をコードしており、βサブユニットと必須のヘテロ二量体を形成して、タンパク質のファルネシル化を触媒します。ファルネシル化は、C末端のCAAXモチーフに付加されるC15イソプレノイド脂質修飾です。この翻訳後修飾は、RASスーパーファミリーのメンバーを含む多様なシグナル伝達タンパク質の膜結合や細胞内輸送を支え、その結果としてMAPKシグナル伝達、細胞骨格の構成、ベシクル動態、細胞周期の進行に影響を与えます。FTαの活性は、プレニル化基質の安定した局在化と機能発揮を可能にすることで、メバロン酸／イソプレノイド生合成経路をプロテオスタシスおよびシグナル伝達に結び付けます。プレニル化の制御異常やFNTA依存的なプロセシングの変化は、異常な増殖シグナルやがん化経路と関連づけられており、FNTAはヒト細胞におけるプレニル化依存的ネットワークの挙動を解析するための有用な標的となります。

FTα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FNTA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FNTA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FNTAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FNTAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。