FSHR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400899-ACT

O FSHR (receptor do hormônio folículo-estimulante) é um receptor humano de hormônio glicoproteico que se acopla principalmente a proteínas Gs para estimular a sinalização cAMP/PKA após a ligação do ligante, moldando programas de transcrição que controlam a diferenciação de células gonadais, a esteroidogênese e a foliculogênese. A ativação do receptor se integra a processos regulatórios mais amplos de GPCR, incluindo dessensibilização do receptor, internalização e dinâmicas de sinalização MAPK a jusante, que influenciam a proliferação e a responsividade endócrina. Alterações na expressão ou na sinalização do FSHR estão associadas a fenótipos endócrinos reprodutivos, como disfunção ovariana, sensibilidade variável a gonadotrofinas e fertilidade comprometida, e o receptor também é usado como marcador de estados celulares responsivos a hormônios. Como o FSHR conecta sinais extracelulares de gonadotrofinas a vias intracelulares de segundos mensageiros, ele é um ponto útil para dissecar a regulação endócrina e transições de estado celular em modelos de biologia reprodutiva.

FSHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FSHR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FSHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FSHR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FSHR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FSHR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FSHR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FSHR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FSHR em células tumorais com expressão de FSHR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.