Frataxin Double Nickaseプラスミド (h): sc-401628-NIC

ヒトFXNはフラタキシンをコードしており、フラタキシンは鉄–硫黄（Fe–S）クラスターの生合成とミトコンドリアにおける鉄の取り扱いの制御に必須な、ミトコンドリアマトリックス内タンパク質です。フラタキシンはISCアセンブリー機構を支援し、酸化的リン酸化、アコニターゼ機能、細胞のレドックス恒常性に関与するFe–S依存性酵素の活性維持に寄与します。FXN機能の低下はミトコンドリア機能障害、酸化ストレス、エネルギー代謝の変調と関連しており、ミトコンドリア品質管理および鉄代謝を司る経路の重要な結節点となっています。FXNは、ミトコンドリアの生体エネルギー機能と鉄に駆動される活性酸素種（ROS）を結び付けるために、神経変性や心代謝ストレスのモデルで広く研究されています。

Frataxin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FXN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FXN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FXNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FXNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。