Fra2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400250-ACT

Das humane Gen **FOSL2** kodiert **Fra2 (FOS-like antigen 2)**, einen bZIP-Transkriptionsfaktor, der mit **JUN-Proteinen** Heterodimere bildet und so **AP-1-Komplexe** erzeugt, die die stimuli-responsive Genexpression regulieren. Fra2 integriert **MAPK/ERK-** und **JNK-Signalwege**, um Programme zu steuern, die mit **Zellzyklusprogression**, **Differenzierung**, **Umbau der extrazellulären Matrix** und **entzündlichen Antworten** verknüpft sind. Eine fehlregulierte **FOSL2/AP-1**-Aktivität wurde mit **onkogenen transkriptionellen Zuständen**, **Gewebefibrose** und **chronischer Entzündung** in Verbindung gebracht, was FOSL2 zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um die transkriptionelle Kontrolle von Stress- und Wachstumsfaktor-Signalwegen zu untersuchen. Fra2-abhängige regulatorische Netzwerke werden häufig in Kontexten wie **epithelial-mesenchymaler Transition**, **Stromaaktivierung** und **zytokingetriebener Signalübertragung** untersucht.

Fra2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOSL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fra2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOSL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOSL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fra2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOSL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fra2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fra2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOSL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.