Fra1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400527-ACT

FOSL1は、AP-1転写因子サブユニットFra1をコードしており、JUNファミリー分子とヘテロ二量体を形成して刺激応答性遺伝子の発現を制御するロイシンジッパータンパク質です。Fra1の活性はMAPK/ERKシグナル伝達の下流に位置し、増殖因子・サイトカイン・ストレス経路からのシグナルを統合して、増殖、分化、細胞外マトリックスのリモデリング、上皮間葉転換（EMT）に関連するプログラムを制御します。FOSL1発現の破綻は、複数の腫瘍コンテキストや炎症状態で報告されており、浸潤、系譜可塑性、微小環境との相互作用を司る転写ネットワークを再構築し得ます。核内レギュレーターとしてのFra1は、ヒト細胞におけるAP-1依存的エンハンサー利用や、コンテキスト特異的な転写回路を解析する上で有用な結節点となります。

Fra1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOSL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Fra1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOSL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOSL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Fra1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOSL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFra1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOSL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFra1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。