FOXQ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403650-ACT

O FOXQ1 humano codifica um fator de transcrição da família forkhead box que regula a diferenciação epitelial, a especificação do destino celular e programas transcricionais que controlam a proliferação e a motilidade. A atividade do FOXQ1 integra-se a redes epigenéticas e de sinalização do desenvolvimento, incluindo vias associadas à transição epitélio–mesênquima (EMT) e à expressão gênica ligada à via Wnt/β-catenina, moldando fenótipos de adesão célula–célula e de migração. A expressão desregulada de FOXQ1 tem sido relatada em múltiplos contextos tumorais e é frequentemente estudada por sua associação com invasão, assinaturas transcricionais relacionadas à metástase e alterações na homeostase epitelial. Como proteína nuclear de ligação ao DNA, o FOXQ1 também é utilizado como marcador e como nó mecanístico em modelos de reprogramação transcricional e plasticidade de linhagem.

FOXQ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXQ1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXQ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXQ1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXQ1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXQ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXQ1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXQ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXQ1 em células tumorais com expressão de FOXQ1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.