FOXP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400542-ACT

FOXP3 codifica um fator de transcrição da família forkhead que atua como regulador definidor de linhagem das células T reguladoras CD4⁺, coordenando a tolerância imunológica e limitando respostas inflamatórias excessivas. Ao moldar programas transcricionais a jusante da sinalização do receptor de células T e de vias de citocinas como IL-2/STAT5 e TGF-β/SMAD, o FOXP3 modula a produção de citocinas efetoras, a remodelação metabólica e a função supressora. A expressão ou atividade desregulada de FOXP3 está associada à ruptura da tolerância periférica e a ampla patologia imunológica, e células T FOXP3-positivas infiltrantes de tumor são estudadas por seus papéis em microambientes imunossupressores. Essas características fazem do FOXP3 um nó-chave para dissecar redes regulatórias gênicas que controlam a homeostase imune.

FOXP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXP3 em células tumorais com expressão de FOXP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.