Plásmido CRISPR de Activación (m) FOXP2: sc-431094-ACT

Foxp2 codifica el factor de transcripción de tipo forkhead box FOXP2, un regulador específico de secuencia que coordina programas génicos que controlan la diferenciación neuronal, la migración y la plasticidad sináptica. En el sistema nervioso del ratón, FOXP2 se expresa de forma destacada en circuitos córtico–ganglios basales y cerebelares, donde influye en la transcripción dependiente de la actividad y en la conectividad, aspectos importantes para el aprendizaje motor y conductas relacionadas con la vocalización. FOXP2 se integra con redes transcripcionales más amplias y con redes de regulación de la cromatina para modular la temporalidad del desarrollo y la maduración de los circuitos. La desregulación de la expresión génica dependiente de FOXP2 se ha vinculado con fenotipos de neurodesarrollo alterados y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar el control transcripcional en el desarrollo y la función del cerebro.

FOXP2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Foxp2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXP2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Foxp2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Foxp2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Foxp2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXP2 en células tumorales con expresión de Foxp2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.