Partículas Lentivirales de Activación (h) FOXM1: sc-416676-LAC

FOXM1 (forkhead box M1) es un factor de transcripción regulado por el ciclo celular que coordina la progresión G1/S y G2/M mediante el control de la expresión de genes implicados en la replicación del ADN, el ensamblaje del huso mitótico, la segregación de la cromatina y la citocinesis. Integra señales aguas arriba procedentes de las redes de ciclinas-CDK y de las vías de puntos de control, y contribuye al mantenimiento de la estabilidad genómica a través de la regulación de programas asociados a la respuesta al daño del ADN y a la reparación. La expresión desregulada de FOXM1 se ha relacionado con fenotipos proliferativos, inestabilidad cromosómica y estados de diferenciación alterados en múltiples contextos de enfermedad humana, incluida la biología del cáncer. Como nodo central en los circuitos transcripcionales de proliferación y respuesta al estrés, FOXM1 se estudia con frecuencia en modelos de tumorogénesis, programas tipo célula madre y resistencia al estrés genotóxico.

Las partículas de activación lentiviral FOXM1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FOXM1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FOXM1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FOXM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FOXM1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FOXM1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.