FOXD2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410785-ACT

FOXD2は、配列特異的なDNAモチーフに結合して遺伝子発現プログラムを制御し、細胞のアイデンティティや発生パターン形成に関与する、フォークヘッドボックス（FOX）ファミリーの転写因子をコードします。核内調節因子として、FOXD2は下流標的遺伝子を協調的に制御することで、系譜決定、分化、組織形態形成を司る転写ネットワークに寄与します。FOXファミリーの転写制御の破綻は、異常な増殖や分化状態の変化としばしば関連しており、FOXD2は発生異常やがんに関連する遺伝子制御回路の研究において重要です。したがってヒトFOXD2は、転写因子量（ドシージ）がクロマチン依存的な転写出力をどのように変化させるかをモデル系で検証するうえで有用です。

FOXD2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXD2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXD2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXD2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXD2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXD2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXD2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXD2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXD2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXD2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。