Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fnk (m): sc-419717

Présentation

Plk3 chez la souris code la kinase sérine/thréonine Fnk, un membre de la famille des kinases de type Polo impliqué dans la signalisation en réponse au stress et le contrôle du cycle cellulaire. Fnk participe à la régulation des points de contrôle et module, via des réseaux de signalisation dépendants de la phosphorylation, des voies liées à la réponse aux dommages de l’ADN, à l’apoptose et à la prolifération. Une activité altérée de PLK3/Fnk a été associée à une progression mitotique dérégulée et à des phénotypes d’instabilité du génome, pertinents pour la biologie du cancer et l’homéostasie tissulaire. Ces propriétés font de Plk3 une cible utile pour étudier la signalisation régulée par les kinases, l’adaptation au stress et les décisions de destinée cellulaire dans des systèmes modèles de mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fnk (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Plk3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Plk3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Plk3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fnk.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Plk3 pour l'étude de la signalisation de Fnk, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Plk3 essentiels à la fonction de Fnk
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Plk3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fnk plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Fnk plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Plk3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fnk plasmide HDR (m) et le Fnk (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Plk3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Plk3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.