FMO3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406605-ACT

A FMO3 humana (monooxigenase 3 contendo flavina) é uma monooxigenase dependente de FAD, localizada no retículo endoplasmático, que catalisa reações de N-oxigenação e S-oxigenação em aminas xenobióticas e endógenas, contribuindo para a depuração metabólica de fase I. Ela desempenha um papel central no metabolismo oxidativo hepático e se integra a redes mais amplas de desintoxicação que atuam em coordenação com enzimas CYP, vias de conjugação e a homeostase redox celular. Alterações na expressão ou atividade da FMO3 podem modificar perfis de metabólitos, incluindo a conversão de trimetilamina (TMA) em N-óxido de trimetilamina (TMAO), com impactos subsequentes na sinalização metabólica e inflamatória. A variação genética em FMO3 está associada à trimetilaminúria e é frequentemente explorada em estudos sobre diferenças interindividuais no metabolismo de fármacos e na sensibilidade a compostos químicos.

FMO3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FMO3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FMO3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FMO3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FMO3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FMO3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FMO3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FMO3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FMO3 em células tumorais com expressão de FMO3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.