FLRG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406439

Panoramica

FSTL3 codifica follistatin-like 3 (FLRG), una glicoproteina secreta appartenente alla rete regolatoria della superfamiglia TGF-β, che lega e neutralizza le activine e ligandi correlati. Modulando l’intensità della segnalazione activina/TGF-β, FLRG influenza programmi trascrizionali dipendenti da SMAD che controllano proliferazione e differenziamento cellulare, infiammazione e rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione di FSTL3 sono state associate a una disregolazione dell’omeostasi endocrina e metabolica e a processi legati ai tumori, quali il comportamento invasivo e le interazioni con lo stroma. FLRG rappresenta quindi un nodo utile per analizzare il controllo extracellulare della segnalazione dei fattori di crescita e fenotipi cellulari dipendenti dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FLRG (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FSTL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FSTL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FSTL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FLRG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FSTL3 per lo studio della segnalazione di FLRG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FSTL3 critici per la funzione di FLRG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FSTL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FLRG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FLRG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FSTL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FLRG Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FLRG (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FSTL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FSTL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.