Flightless I Double Nickaseプラスミド (h): sc-401667-NIC

FLIIは、進化的に保存されたゲルゾリンファミリーに属するアクチン再構成タンパク質であるFlightless Iをコードしており、細胞骨格ダイナミクスと転写制御を協調させる役割を担います。Flightless Iは、アクチン構造の調節や、Rho GTPase依存性経路およびフォーカルアドヒージョン関連プロセスなどのシグナル伝達ネットワークとの相互作用を介して、細胞移動、接着、創傷応答プログラムに関与します。核内では、クロマチン関連複合体や転写出力に影響を及ぼし、炎症およびストレス応答性遺伝子発現の形成に寄与し得ます。FLII活性の破綻は、上皮修復の変化、免疫シグナルの表現型、腫瘍関連の細胞運動性の変化と関連づけて文献で報告されており、細胞骨格から核への情報伝達を解明する機構研究における有用な標的となっています。

Flightless I ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FLII 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FLII内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FLIIの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FLIIが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。