FLG/Filaggrin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400644-NIC

FLGはフィラグリンをコードしており、フィラグリンは表皮の分化過程にあるケラチノサイトでプロフィラグリンとして産生された後、プロテアーゼによってフィラグリン単量体へと処理され、ケラチン中間径フィラメントを凝集させる重要な構造タンパク質です。この働きにより、表皮の終末分化、角質細胞（コルネオサイト）の緻密化、角層バリアの形成が支持されます。また、さらに分解されて生じる産物は、保湿を調節し皮膚表面のpHを整える天然保湿因子（NMF）の構成要素にもなります。FLGの機能は、表皮分化のシグナル伝達ネットワーク下流にある角化およびコーニファイド・エンベロープ（角化細胞膜）組み立てプログラムと統合されています。遺伝的多型やフィラグリン発現の低下は、バリア機能障害の表現型や炎症性皮膚疾患への感受性と強く関連することから、FLGは上皮の恒常性や皮膚炎症機構を研究するうえで頻繁に対象となる遺伝子です。

FLG/Filaggrin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FLG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FLG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FLGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FLGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。