Plásmido CRISPR de Activación (h) FKHR/FOXO1: sc-400137-ACT

FOXO1 (FKHR) codifica un factor de transcripción de la familia forkhead box que integra señales de insulina/IGF-1 y de factores de crecimiento para coordinar el control del ciclo celular, la apoptosis, las respuestas al estrés oxidativo y la homeostasis metabólica. La actividad de FOXO1 está regulada por modificaciones postraduccionales y por su localización subcelular aguas abajo de la señalización PI3K–AKT, con aportes adicionales de AMPK y de vías activadas por estrés. En el núcleo, FOXO1 regula programas transcripcionales implicados en la gluconeogénesis, la autofagia y la diferenciación, moldeando decisiones de destino celular dependientes del contexto. La desregulación de la señalización de FOXO1 se ha implicado en la resistencia a la insulina y las enfermedades metabólicas, la alteración de la función de células inmunitarias y procesos oncogénicos, incluida la fusión PAX3–FOXO1 observada en el rabdomiosarcoma alveolar.

FKHR/FOXO1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXO1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FKHR/FOXO1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXO1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXO1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FKHR/FOXO1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXO1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FKHR/FOXO1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FKHR/FOXO1 en células tumorales con expresión de FOXO1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.