FKBP25 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410783-ACT

O gene humano **FKBP3** codifica a **FKBP25**, uma imunofilina nuclear ligante de FK506 com atividade de isomerase cis–trans peptidil-prolil, que auxilia o dobramento de proteínas e a regulação conformacional de complexos nucleares. A FKBP25 interage com fatores associados à cromatina e contribui para o controle da transcrição, a resposta a danos no DNA e processos nucleares ligados ao ciclo celular, incluindo a modulação da sinalização dependente de p53. Por meio dessas funções, o FKBP3 é estudado em contextos de estabilidade do genoma, regulação epigenética e programas de transcrição adaptativos ao estresse. Alterações na atividade e na expressão de FKBP3/FKBP25 têm sido investigadas na biologia de doenças proliferativas e associadas à inflamação, como correlatos de sinalização nuclear desregulada e de disfunção da cromatina.

FKBP25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FKBP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FKBP25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FKBP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FKBP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FKBP25. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FKBP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FKBP25 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FKBP25 em células tumorais com expressão de FKBP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.