FKBP25 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410783-ACT

ヒトFKBP3はFKBP25をコードしており、FKBP25は核内に局在するFK506結合性のイムノフィリンで、ペプチジル‐プロリルcis–trans異性化酵素（PPIase）活性を介してタンパク質のフォールディングや核内複合体の構造制御を支えます。FKBP25はクロマチン関連因子と相互作用し、転写制御、DNA損傷応答、ならびにp53依存性シグナルの調節を含む細胞周期に連動した核内プロセスに寄与します。これらの役割から、FKBP3はゲノム安定性、エピジェネティック制御、ストレス適応的な転写プログラムといった文脈で研究されています。FKBP3/FKBP25の活性や発現の変化は、核内シグナル伝達およびクロマチン機能の破綻と関連する指標として、増殖性疾患や炎症関連疾患の病態生物学において検討されてきました。

FKBP25 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FKBP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FKBP25 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FKBP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFKBP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FKBP25の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFKBP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFKBP25依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFKBP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFKBP25経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。