Plásmido CRISPR de Activación (h) FKBP25: sc-410783-ACT

El gen humano **FKBP3** codifica **FKBP25**, una inmunofilina nuclear de unión a FK506 con actividad isomerasa cis–trans de peptidil-prolil, que favorece el plegamiento proteico y la regulación conformacional de complejos nucleares. FKBP25 interactúa con factores asociados a la cromatina y contribuye al control transcripcional, la respuesta al daño del ADN y procesos nucleares ligados al ciclo celular, incluida la modulación de la señalización dependiente de p53. A través de estas funciones, FKBP3 se estudia en contextos de estabilidad del genoma, regulación epigenética y programas transcripcionales de adaptación al estrés. Las alteraciones en la actividad y la expresión de FKBP3/FKBP25 se han investigado en la biología de enfermedades proliferativas y asociadas a la inflamación como correlatos de una señalización nuclear y una función de la cromatina desreguladas.

FKBP25 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FKBP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FKBP25 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FKBP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FKBP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FKBP25. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FKBP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FKBP25 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FKBP25 en células tumorales con expresión de FKBP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.