Filamin 1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431396-ACT

マウスFlnaはフィラミン1をコードしており、フィラミン1は高分子量のアクチン結合性スキャフォールドタンパク質として、F-アクチンを架橋し、細胞骨格を膜貫通受容体と連結することで、細胞形態、接着、メカノセンシング（機械刺激の感知）を制御します。フィラミン1は、インテグリン依存的な接着、フォーカルアドヒージョンのターンオーバー、RhoファミリーGTPaseに駆動される細胞骨格リモデリングのためのシグナル伝達ハブを形成し、細胞移動や組織形態形成に影響を与えます。膜タンパク質やシグナル伝達タンパク質との相互作用を介して、エンドサイトーシス、膜安定性、力に応答する転写プログラムなどの過程も調節します。FLNA機能の破綻は発生異常や神経血管系の表現型と関連づけられており、細胞運動性、バリア機能の維持、細胞骨格シグナル伝達ネットワークにおける役割が広く研究されています。

Filamin 1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Flnaの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Filamin 1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Flna 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFlna転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Filamin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFlna遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFilamin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFlna発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFilamin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。