Fibronectin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400082-ACT

FN1はフィブロネクチンをコードしており、フィブロネクチンは主要な細胞外マトリックス（ECM）糖タンパク質として、インテグリン、コラーゲン、ヘパラン硫酸プロテオグリカンへの結合を介して細胞接着、遊走、組織リモデリングを統括します。フィブロネクチンはフォーカルアドヒージョンおよびメカノトランスダクション（機械刺激の情報伝達）シグナルに関与し、アクチン細胞骨格のダイナミクスを協調して制御するとともに、FAK/SRC、Rho GTPaseシグナル、TGF-βによって駆動される細胞外マトリックス構築などの経路を調節します。ヒト生物学において、FN1の発現量や沈着の変化は、創傷治癒の破綻、線維化、腫瘍細胞の浸潤、ならびに間質微小環境のリモデリングと関連しています。これらの特性により、FN1は細胞外マトリックスの組み立て、上皮―間葉系の可塑性、インテグリン依存性シグナルネットワークを研究するうえで中心的な標的となります。

Fibronectin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Fibronectin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Fibronectinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFibronectin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFibronectin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。