Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fibronectin: sc-400082-ACT

FN1 code pour la fibronectine, une glycoprotéine majeure de la matrice extracellulaire qui orchestre l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que le remodelage tissulaire en se liant aux intégrines, au collagène et aux protéoglycanes à sulfate d’héparane. La fibronectine intervient dans les adhésions focales et la signalisation de mécanotransduction, en coordonnant la dynamique du cytosquelette d’actine et en régulant des voies telles que FAK/SRC, la signalisation des GTPases Rho et l’organisation de la matrice extracellulaire induite par le TGF-β. En biologie humaine, une expression ou un dépôt altérés de FN1 sont associés à une réparation des plaies dysrégulée, à la fibrose, à l’invasion tumorale et au remodelage du microenvironnement stromal. Ces propriétés font de FN1 une cible centrale pour l’étude de l’assemblage de la matrice extracellulaire, de la plasticité épithélio-mésenchymateuse et des réseaux de signalisation dépendants des intégrines.

Fibronectin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fibronectin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fibronectin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fibronectin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fibronectin dans les cellules tumorales présentant une expression de FN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.