Fibrinogen αCRISPR激活质粒(h): sc-400793-ACT

FGA 编码纤维蛋白原 α 链，是血浆纤维蛋白原六聚体的核心组成部分；在凝血过程中，纤维蛋白原在凝血酶的蛋白水解作用下转化为纤维蛋白。除参与血凝块形成外，纤维蛋白（原）还与血小板聚集、整合素介导的黏附以及细胞外基质重塑相互作用，将止血过程与炎症反应和创伤修复联系起来。在肝细胞及急性期反应等情境中，FGA 表达的调控会影响循环纤维蛋白原水平，并影响凝血酶/PAR 与纤溶通路中的下游信号传导。纤维蛋白原生成或加工过程的失调与遗传性纤维蛋白原疾病相关，并可促成血栓与炎症性疾病表型，这些均与心血管及肝脏生物学研究密切相关。

Fibrinogen α CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FGA的表达。

Fibrinogen α CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FGA基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FGA转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Fibrinogen α表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FGA位点，并能够研究内源性位点上依赖于Fibrinogen α的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FGA表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Fibrinogen α通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。