Fibrinogen α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400793-ACT

FGA はフィブリノゲン α 鎖をコードしており、血漿フィブリノゲン六量体の中核を成す構成要素です。血液凝固の過程で、フィブリノゲンはトロンビンによるタンパク質分解を受けてフィブリンへと変換されます。血栓形成にとどまらず、フィブリン（フィブリノゲン）は血小板凝集、インテグリン介在性の接着、細胞外マトリックスのリモデリングにも関与し、止血を炎症や創傷修復と結び付けています。肝細胞における FGA 発現や急性期反応下での制御は、循環中フィブリノゲン濃度ならびにトロンビン／PAR 経路や線溶系経路における下流シグナルに影響を及ぼします。フィブリノゲン産生またはプロセシングの異常は、遺伝性フィブリノゲン異常症と関連するほか、血栓性・炎症性疾患の表現型にも寄与しており、心血管および肝臓生物学の研究において重要です。

Fibrinogen α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FGAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Fibrinogen α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FGA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFGA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Fibrinogen αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFGA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFibrinogen α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFGA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFibrinogen α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。