FHL-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405145-NIC

FHL3は、four-and-a-half LIM domains protein 3（FHL-3）をコードしており、FHL-3はLIMドメインのみからなるアダプターとして多タンパク質複合体の形成を組織化し、シグナル伝達および細胞骨格プログラムを調節します。FHL-3は、LIMドメインを介した相互作用をMAPKシグナル伝達や細胞周期・分化関連遺伝子の発現制御などの経路に結び付けることで、転写制御およびメカノトランスダクションに関与します。これらの足場（スキャフォールド）機能を通じて、FHL-3は多様な細胞種における細胞接着、遊走、ならびにストレス応答性のリモデリングに影響を与えます。FHL3発現の異常や、LIM介在性相互作用の変化は、腫瘍細胞の挙動の変化や心血管・骨格筋に関連する表現型と関連づけられており、疾患関連シグナル伝達ネットワークの機序研究において重要な分子です。

FHL-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FHL3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FHL3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FHL3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FHL3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。