FEZ1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404727-ACT

LZTS1（別名FEZ1）は、ロイシンジッパー型の腫瘍抑制因子をコードしており、細胞周期進行の制御やゲノム安定性の維持に寄与します。FEZ1は微小管および中心体関連のプロセスと関連づけられており、有糸分裂の制御機構との相互作用を通じて、チェックポイント制御や細胞増殖に影響を及ぼし得ます。LZTS1の発現低下または欠失は複数のヒトがんで報告されており、制御不全の増殖や細胞周期制御の変化と関連しています。これらの特徴により、FEZ1は腫瘍抑制経路、有糸分裂の忠実性、ならびにヒト細胞における状況依存的な転写制御を研究するための有用なモデルとなります。

FEZ1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LZTS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FEZ1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LZTS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLZTS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FEZ1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLZTS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFEZ1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLZTS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFEZ1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。